大家好，我是小一，我来lai为大家解答以上shang问题。蛋白纯化磁珠，蛋白纯化很多人ren还不知道，现在让我们一起来看kan看吧！
蛋白质分离纯chun化的一般程序可分fen为以下几个步骤zhou：
（一）材料的预yu处理及细胞破碎
分离li提纯某一种蛋白质时，首shou先要把蛋白质从组织或细胞中释放fang出来并保持原来的天然状态，不丧失shi活性。所以要采用适当的方法fa将组织和细胞破碎。常用的破po碎组织细胞的方法有：
1.机械破碎法
这种方法是shi利用机械力的剪切作用yong，使细胞破碎。常用设备有，高速su组织捣碎机、匀yun浆器、研钵等。
2.渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细xi胞溶胀而破碎。
3.反复冻融法
生物组织经冻结后，细胞内液ye结冰膨胀而使细胞胀破。这zhe种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的de蛋白质不宜采用此ci法。
4.超声波法
使用超声波震zhen荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞bao破碎。
5.酶mei法
如用溶菌酶mei破坏微生物细胞bao等。
(二er)蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲chong液溶剂把蛋白质提取qu出来。抽提所用缓冲chong液的pH、离子zi强度、组成成分等条件的选择应根gen据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋dan白的抽提，抽提缓冲液中zhong一般要加入表面活性xing剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100 等），使膜结构gou破坏，利于蛋白质与膜分fen离。在抽提过程中，应ying注意温度，避免剧烈搅jiao拌等，以防止蛋白质的de变性。
（三san）蛋白质粗制品的获得de
选用适当的方法将所要yao的蛋白质其它杂za蛋白分离开来。比较方便的有效方法fa是根据蛋白质溶解jie度的差异进行的分离。常用的有下xia列几种方法：
1.等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同tong，可用等电点沉淀法使它们相互hu分离。
2.盐析xi法
不同蛋白质盐析所需xu要的盐饱和度不同tong，所以可通过调节jie盐浓度将目的蛋白沉淀析xi出。被盐析沉淀下来的de蛋白质仍保持其天然性质zhi，并能再度溶解而不变性。
3.有机溶剂沉淀法
中性有机溶剂如乙醇、丙酮tong，它们的介电常数比水低di。能使大多数球状蛋白质在水溶rong液中的溶解度降低di，进而从溶液中沉淀出来，因此ci可用来沉淀蛋白bai质。此外，有机溶剂会破坏huai蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子zi变得不稳定而析出。由于yu有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时shi，要注意在低温下操作zuo，选择合适的有机溶剂ji浓度。
（四）样品pin的进一步分离纯化
用等电点沉淀法、盐析法fa所得到的蛋白质一yi般含有其他蛋白质杂质，须xu进一步分离提纯才能得到有一定纯度du的样品。常用的纯chun化方法有：凝胶过滤lu层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。
有时还需xu要这几种方法联合使用才能得到dao较高纯度的蛋白质样品。
本文到此讲解完毕bi了，希望对大家jia有帮助。
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